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薄层层析法监测2-乙酰氨基-3，4，6-三乙酰葡萄糖的合成 |
点击次数：276 发布时间：2006-7-17
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赵先英 ，郑江，季卫刚
(1．第三军医大学化学教研室； 2．第三军医大学西南医院，重庆400038
细菌内毒素(endotoxin，ET)是存在于革兰氏阴性菌细胞壁上的脂多糖(1ipoposaccharide，LPS)，繁殖活跃或静止期死亡的细菌壁均可释放出I PS。当LPS进人血流达一定浓度(>40ng·I )时可出现寒战、高热、低血压和弥漫性血管内凝血(DIC)等一系列症状，严重威胁着人体健康。因此寻找能有效治疗革兰氏阴性菌感染的方法，一直是临床医学关注的焦点和热点。针对I PS与受体CD14的结合，从Lipid A的结构出发，以非肽类物质拈抗内毒素受体CD14为治疗手段的研究，在国际上正进行研究。而2一乙酰氨基一3，4，6一三乙酰葡萄糖是合成Lipid A系列类似物的重要中间体。
它的合成一般是通过氨基葡萄糖五乙酸酯的选择性水解得到 引。本法以三乙氨为催化剂，用氨基葡萄糖盐酸盐和乙酸酐反应，再经选择性水解成功制备出了2一乙酰氨基一3，4，6一三乙酰葡萄糖。
以往对合成过程的监控多使用高效液相色谱法(HPI )，但此仪器昂贵，分析成本高，且分析时间长，不适于合成过程的在线监控。为此，使用了快捷、简便的薄层色谱法(TLC)监控2一乙酰氨基一3，4，
6一三乙酰葡萄糖合成的全过程，取得了满意的结果。
1 试验部分
1．1 试剂
合成反应试剂：乙腈、无水硫酸钠、钢瓶氨气(100 )。
流动相溶剂：乙酸乙酯、己烷、石油醚(沸程60～ 90℃ )。
层析槽；硅胶薄层层析板(20cmX 5cm)。所用试剂均为分析纯
1．2 试验方法
中间体2一氨基葡萄糖一五乙酸酯的制备可见文献。
1．2．1 2一乙酰氨Kk-3，4，6一三乙酰葡萄糖的制备在装有搅拌器、温度计和通气装置的三颈烧瓶中，将一定量的2一氨基葡萄糖～五乙酸酯溶于一定体积的乙腈中，冰浴下通人氨气一段时间。停止通气，室温下继续反应。TI C监测反应进程。
待反应结束后，低温旋转蒸发除去溶剂，得到一淡黄色浆状物，硅胶柱分离，以适当的溶剂为洗脱剂淋洗。收集液低温浓缩，即可得到目标化合物2一乙酰氨基一3，4，6一三乙酰葡萄糖，产率为58．6 ，对一二甲氨基苯甲醛用光度分析法测定其质量分数为99．1％。
1．2．2 薄层展开
根据要求对样品进行点样(样品浓度约0．01％ ，点样体积约l l，原点直径约3ram，起始线距1．5cm，展距16cm)，并选择合适的展开剂，采用上行展开法展开。试验发现，当展开剂组成为V正己烷：V乙酸乙醣=1：1，显色后，显示三个斑点。Rf值分别为0．82，0．56，0．42；经核磁及红外光谱结构分析，Rf一0．42的成分是目标化合物2一乙酰氨基一3，4，6一三乙酰葡萄糖。
2 结果与讨论
2．1 展开剂的选择
薄层层析是被分离样品、吸附剂与展开剂共同作用的结果，因此，能找到与样品及吸附剂相匹配的展开剂是直接影响薄层层析的关键因素。展开剂最重要的性质是极性、强度和选择性。在层析过程中，展开剂的极性和强度将决定样品组分在薄层上的R r值。展开剂极性的大小可用极性参数P 来表示。常见展开剂的P 值见表1 ，混合展开剂的P值可根据下式计算：
在层析法中，即使是极性强度相同的展开剂，其对样品的选择性和分离度也可能存在较大的差别。Snyde~ 把溶剂的偶极(xn)、质子给体(xd)和质子受体(xe)等作用力作为溶剂选择性分组的根据(Xn+Xd+Xe)，把普通溶剂分成8组。同组内的溶剂具有相似的选择性，不同组之间有显著的差别。由于不同组的溶剂具有不同的选择性，因此可以通过组与组之间溶剂的改换使展开剂的选择性有所改变，产生好的分离效果。
根据溶剂选择的三角形原理及Snyder的溶剂分组依据，通过试验，选择了V正己烷：V乙酸乙酯=1：1为二元混合展开剂，此展开剂的极性参数为：
层析结果表明，主产物、原料和中间体的Rr值分别为0．42，0．82，0．56，说明采用该二元混合展开剂可以将样品中各组分完全分开。该展开剂完全适合于2一乙酰氨基一3，4，6～三乙酰葡萄糖在线监控。
2．2 斑点定位方法的选择
层析法中常用的定位方法有光学检出法、碘蒸气检出法和试剂显色法。由于本样品在254nm和365nm波长处没有吸收，因此不选用光学检出法定位。试剂显色定位法尽管灵敏度高，但操作繁琐。碘蒸气熏蒸法操作简便，定位效果明显。选择碘蒸气熏蒸法定位显色。
2．3 反应进程的指示
通过薄层监控得出的最佳反应条件为以2一氨基葡萄糖一五乙酸酯为原料，在溶剂乙腈的存在下，冰水浴中通人氨气，区域选择性脱去1位的乙酰基，合成目标化合物2一乙酰氨基一3，4，6一三乙酰葡萄糖。 |
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